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紫外分光光度法測定蛋白質含量的實驗原理

發(fā)布時間:2025-01-24
由于蛋白質分子中*和*殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵,因此蛋白質具有吸收紫外線的性質,吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內,蛋白質溶液的光吸收值(od280)與其含量呈正比關系,可用作定量測定。
利用紫外吸收法測定蛋白質含量的優(yōu)點是民迅速、簡便、不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測定。因此,在蛋白質和酶的生化制備中(特別是在柱層析分離中)得到廣泛應用。
此法的缺點是:(1)對于測定那些與標準蛋白質*和*含量差異較大的蛋白質,有一定的誤差;(2)若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質,會出現(xiàn)較大的干擾。根據(jù)蛋白質和核酸的吸收高峰不同,并利用這一性質,通過計算可以適當校正核酸的干擾作用。
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