dapi配置方法
dapi是一種可與dna的小溝結(jié)合的細(xì)胞滲透性熒光探針，它可與雙鏈dna結(jié)合，發(fā)出藍(lán)色熒光，熒光強(qiáng)度是自身的20倍。瓊脂糖凝膠電泳dna的染色中dapi的染色效果是溴化乙淀的數(shù)倍。dapi也能對(duì)rna染色，染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“au序列”并發(fā)出熒光。
dapi常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。盡管dapi不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。dapi具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測(cè)酵母線粒體dna，葉綠體dna，病毒dna，支原體dna以及染色體dna。
dapi-dna復(fù)合物的最大激發(fā)光為364nm，最大發(fā)射光為454nm。dapi水溶液在349nm處和263nm處有吸收峰。它可以與熒光素二乙酸酯結(jié)合使用用于成熟花粉粒細(xì)胞核的活體染色。
使用方法：
1. 配制方法：用1ml ddh2o將dapi溶解，制得2.9mm的dapi溶液(1mg dapi/1ml h2o)。取適量dapi水溶液加到pbs或雙蒸水中，制備成10～50µm的dapi工作液。
注：dapi不能直接用pbs等緩沖溶液溶解，需要先用水將其溶解。
2. 使用濃度：0.5-10 μg/ml
3. 使用方法：
a：固定的細(xì)胞或組織染色：
1) 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。dapi染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行dapi 染色。
2) 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量dapi染色液，覆蓋住樣品即可。
3) 對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。
4) 吸除dapi染色液，用tbst、pbs或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
5) 用帶有360nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
b：活細(xì)胞或組織染色：
1) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量dapi染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于6孔板一個(gè)孔需加入1 ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100 μl染色液。
2) 在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。
3) 用 pbs或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
4) 用帶有360nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
儲(chǔ)存溫度：2-8℃干燥避光保存。
關(guān)鍵詞：染色機(jī) 熒光顯微鏡 流式細(xì)胞儀 顯微鏡