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【提醒】液相色譜操作過程常被忽略的問題

發(fā)布時間:2025-03-25

因為塵?;蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥,因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾,而常用的方法是濾過,可采用millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經(jīng)常清洗或更換。
【使用后沒有及時清洗泵】
流動相不應含有任何腐蝕性物質(zhì),含有緩沖液的流動相不應保留在泵內(nèi),尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi),由于蒸發(fā)或泄漏,甚至只是由于溶液的靜置,就可能析出鹽的微細晶體,這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此,必須泵入純水將泵充分清洗后,再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合硅膠固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。
【流動相走空】
泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完,否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán),最終產(chǎn)生漏液。沒有流動相流出,又無壓力指示怎么辦?可能是泵內(nèi)有大量氣體,這時可打開泄壓閥,使泵在較大流量(如5ml/min)下運轉(zhuǎn),將氣泡排盡,也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損,需更換。
【壓力和流量不穩(wěn)】
原因可能是氣泡,需要排除;或者是單向閥內(nèi)有異物,可卸下單向閥,浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡,或被鹽的微細晶?;蜃躺奈⑸锊糠侄氯?,這時,可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡,或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸(如4mol/l硝酸)內(nèi)迅速除去微生物,或?qū)Ⅺ}溶解,再立即清洗。
壓力為啥過高或過低?可能是是管路被堵塞,需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。在進行梯度洗脫時,由于多種溶劑混合,而且組成不斷變化,因此帶來一些特殊問題,必須充分重視。ps:在液相色譜中對組分復雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中,按一定程序不斷改變流動相的濃度配比,稱為梯度洗脫。從而可以使一個復雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。梯度洗脫的優(yōu)點:1.縮短分析周期;2.提高分離能力;3.峰型得到改善,很少拖尾;4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
【梯度洗脫的流動相選擇不當】
要注意溶劑的互溶性,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,超出范圍后就不互溶,使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時,還可能析出鹽的晶體,尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
gi-3000-01等度液相色譜儀,系統(tǒng)由手動進樣器、高壓恒流泵、色譜柱(可選柱溫箱)、uv紫外檢測器四單元部分以及功能強大的色譜軟件所組成,所有單元模塊均具有高效液相兼容性,讓所有使用者獲得較好的性能,較少設備和耗材費用支出。gi-3000系列提供了各類輸液泵,多種檢測器和手動/自動進樣器。為用戶提供了多種選擇,從而為用戶的分析提供了多方位的解決方案。
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