目前，世界上使用的農(nóng)藥已超過(guò)800種，其中很多化合物在飲用水和食品中法定允許量即大殘留 限要求得到控制。對(duì)于這種目標(biāo)物分析，迫切需要能夠進(jìn)行同時(shí)多殘留組分的分析方法，這樣可以大大 降低工作量。但是，很多農(nóng)藥用gc-ms分析很困難或幾乎不能分析，但是卻可以用lc-ms/ms多殘留組分 分析方法進(jìn)行鑒定和定量。mrm（多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）是優(yōu)先選擇的掃描模式，然而，對(duì)每個(gè)農(nóng)藥而言，單一 mrm離子對(duì)并不能夠確證該農(nóng)藥的存在，需要采用第二個(gè)mrm離子對(duì)來(lái)驗(yàn)證分析結(jié)果。絕大多 數(shù)樣品，如水果、蔬菜等，含有需要監(jiān)測(cè)的農(nóng)藥種類不超過(guò)10%，因此，一部分確證離子對(duì)并不需要，因 為有部分農(nóng)藥并不存在，先前的采集時(shí)間浪費(fèi)掉了。所以，我們研究了一種采用單一mrm離子對(duì)鑒定和 定量農(nóng)藥的方法。
本研究利用新型串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀- 四極桿 -線性離子阱融合質(zhì)譜儀3200 qtrap®的mrm掃描觸 發(fā)“增強(qiáng)子離子掃描epi”的“信息關(guān)聯(lián)掃描information-dependent acquisition (ida)”技術(shù)確證所檢測(cè)的化 合物。其結(jié)果是ms/ms系統(tǒng)的采集時(shí)間主要用于大多數(shù)目標(biāo)化合物的快速篩選上，只有當(dāng)檢測(cè)到某個(gè) 農(nóng)藥存在時(shí)才自動(dòng)進(jìn)行確證測(cè)定。確證測(cè)定提供了碰撞碎片離子的全譜，與農(nóng)藥譜庫(kù)中的圖譜進(jìn)行檢
索、比較。
樣品制備 樣品制備如圖1所示
色譜分離條件 agilent 1100液相色譜系統(tǒng)：二元泵系統(tǒng)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。 色譜柱：phenomenex aqua，5 µm，18 å，c18，50 mm×2 mm。 流動(dòng)相：a相—水 + 5 mmol/l甲酸銨；b相—甲醇 + 5 mmol/l甲酸銨。 步驟 時(shí)間 (min) 流速(µl/min) a (%) b (%) 0 0.00 200 80 20 1 11.00 200 10 90 2 23.00 200 10 90 柱溫箱溫度：20 ℃；進(jìn)樣體積：20 µl。
色譜分離條件 agilent 1100 系統(tǒng)：二元泵系統(tǒng)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。 色譜柱：phenomenex aqua，5 µm，18 å，c18，50 mm×2 mm。 流動(dòng)相：a相—水 + 5 mmol/l甲酸銨；b相—甲醇 + 5 mmol/l甲酸銨。 步驟 時(shí)間 (min) 流速(µl/min) a (%) b (%) 0 0.00 200 80 20 1 11.00 200 10 90 2 23.00 200 10 90 柱溫箱溫度：20 ℃；進(jìn)樣體積：20 µl。
ms/ms檢測(cè) 3200 qtrap® lc-ms/ms系統(tǒng)，turboionspray®離子源（450 ℃），正離子方式模式。采用ida關(guān)聯(lián)掃 描包含297組mrm離子對(duì)（駐留時(shí)間為5 ms，停留時(shí)間為1 ms，碰撞能量ce分別為+20、+35、+50 ev） 的篩選檢測(cè)掃描和在20、35、50 ev碰撞能下3個(gè)epi掃描，掃描速度4000 amu/s，填充時(shí)間（fill time）為 100 ms。采用動(dòng)態(tài)背景減法（dynamicbackgroundsubtraction，sbs）對(duì)篩選檢測(cè)掃描中的峰進(jìn)行鑒定，然 后在包含有碰撞能量ce分別為+20、+35、+50 ev獲得的質(zhì)譜圖庫(kù)中檢索、鑒定。
結(jié)果 作為特色，串聯(lián)四極桿的mrm掃描由于其具有高靈敏度和高選擇性是定量測(cè)定的shou選。要成功地進(jìn) 行多目標(biāo)農(nóng)藥化合物的檢測(cè)，必須要有一個(gè)快速碰撞室。技術(shù)linac® 線性加速碰撞室用在ab公 司所有的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀和四極桿-線性離子阱融合質(zhì)譜儀上，它采用一個(gè)軸向電場(chǎng)加速碰撞后的碎片 離子，大大縮短了離子的駐留時(shí)間，而信號(hào)強(qiáng)度基本不受影響。以前的研究發(fā)現(xiàn)，用api 2000™ lc-ms/ms 檢測(cè)100種農(nóng)藥時(shí)25 ms的離子駐留時(shí)間綽綽有余，如今，3200 qtrap® lc-ms/ms的靈敏度大大提高，因 此可以*地縮短每個(gè)mrm離子對(duì)的離子駐留時(shí)間，從而增加檢測(cè)化合物的數(shù)量。圖2顯示了用5 ms駐留 時(shí)間檢測(cè)300種農(nóng)藥(100 ng/ml)的mrm色譜圖。圖3顯示了1 ng/ml 12種農(nóng)藥的mrm靈敏度數(shù)據(jù)，可用于水
加水至 5 g或10 g干燥或含水樣品中總體積至10 ml
加入20 ml甲醇均化，如需要可過(guò)濾或離心
加入氯化鈉溶液浸泡，chem elut
二氯甲烷提取，蒸發(fā)至干
甲醇/水溶劑再溶解 (樣品濃度約 1 g/ml)
0.45 µm膜過(guò)濾
50 mm x 2 mm rp18-柱，水 / 甲醇 + 5 mmol/l甲酸銨
lc-ms/ms esi+，297 mrm +3 epi 模式分析
同時(shí)鑒定和定量水果和蔬菜中300種農(nóng)藥及其代謝物
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果和蔬菜提取物中農(nóng)藥的定量分析。圖4顯示了不同水果和蔬菜提取物的例子，在蘋果樣品中發(fā)現(xiàn)了蟲(chóng)酰 肼（tebufenozide）并定量為11 µg/kg。為了確證蟲(chóng)酰肼的定量數(shù)據(jù)，其epi譜被自動(dòng)采集并與譜庫(kù)中的圖 譜比對(duì)。純度符合度（purity fit）是確定譜庫(kù)中的圖譜與未知物的圖譜符合的程度，如圖5所示。用動(dòng)態(tài) 背景減法（sbs）在檢測(cè)mrm離子對(duì)后觸發(fā)epi掃描，這樣對(duì)于確證特別是對(duì)于共洗脫化合物能夠獲得高 質(zhì)量的ms/ms圖譜。